Influence of Volume of Nutrient Agar Medium on Development of Colonies of Marine Bacteria

Abstract

Plating the heterogeneous bacteria occuring naturally in samples of raw sea water with volumes of molten nutrient agar exceeding 10 ml reduces the number of colonies which develop. Plate counts on replicate samples of sea water are generally highest and results are more nearly reproducible when 10 ml of nutrient agar is used rather than volumes ranging randomly from 5 to 30 ml. Although other factors are involved, the adverse effects of volumes of nutrient agar appreciable larger than 10 ml are attributed primarily to the slower cooling rates during conventional plating procedures. When nutrient agar medium at 42° C was poured into pyrex Petri dishes at room temperature (22–24° C), 10 ml of the medium cooled to 30° C in about one minute, whereas from about 5 to 24 minutes were required for 20 to 50 ml of the medium to cool from 42° C down to 30 ° C. Many marine bacteria are injured by being subjected to temperatures higher than 30° C, the extent of the injury being a function of time. Therefore, it is of paramount importance that agar be cooled to 42° C prior to pouring. The rate at which agar medium cools in plates is influenced by the composition and temperature of the table top on which the plates rest.

Zusammenfassung

Bei der Bestimmung der Anzahl Bakterien in frisch genommenen Seewasserproben mit dem Plattengußverfahren reduziert eine Agarmenge von über 10 ml die Anzahl sich entwickelnder Kolonien. Die erhaltenen Zahlen sind im allgemeinen am höchsten und die Ergebnisse am besten reproduzierbar, wenn genau 10 ml des Nähragars benutzt wird im Gegensatz zu unbestimmten Mengen zwischen 5 und 30 ml. Obgleich auch andere Faktoren eine Rolle spielen, wird der ungünstige Einfluß von Agarmengen, die merklich größer als 10 ml sind, in erster Linie den langsameren Abkühlungsraten während des üblichen Plattengußverfahrens zugeschrieben. Wenn Nähragar von 42° C bei Raumtemperatur (22–24° C) in Pyrex-Petrischalen gegossen wurde, kühlten 10 ml in ca. 1 min. auf 30° C ab, während 5 bis 24 min. gebraucht wurden, um Agarmengen von 20 bis 50 ml von 42° C auf 30° C abzukühlen. Viele marine Bakterien werden geschädigt, wenn sie Temperaturen ausgesetzt werden, die über 30° C liegen, wobei das Ausmaß der Schädigung von der Einwirkungszeit abhängt. Deswegen ist es überaus wichtig, daß der Agar vor dem Gießen auf 42° C gekühlt wird. Die Abkühlungsrate des Agarmediums in den Platten wird von der Beschaffenheit und der Temperatur der Tischoberfläche, auf der die Platten stchen, beeinflußt.